標(biāo)簽：細(xì)菌細(xì)胞壁 細(xì)胞破碎 細(xì)胞裂解
細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中，尤其是植物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，常常會(huì)遇到的細(xì)胞裂解的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，目的是通過(guò)機(jī)械貨非機(jī)械的方法打破細(xì)胞壁的束縛，從而在進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)部完成DNA編輯相關(guān)操作的一種實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞破碎的方法有哪些?總結(jié)方法主要有以下8種：
一、細(xì)胞破碎的機(jī)械方法
機(jī)械細(xì)胞破壞實(shí)際上就是這樣：通過(guò)固體或液體剪切的方式強(qiáng)行打開(kāi)細(xì)胞壁并溢出內(nèi)容物。機(jī)械破碎的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)引入可能干擾您想要提取的物質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)。然而，容易造成大分子內(nèi)容物失活。
1.研缽和研杵
研磨破壁法通常是將植物組織樣本放在置于冷凍液氮中，通過(guò)組織研磨器的研磨來(lái)完成的。當(dāng)組織材料被破壞時(shí)，可以通過(guò)添加溶劑來(lái)提取代謝物。
2.珠磨法
珠磨法是指在等量的細(xì)胞懸液和渦旋混合器中加入玻璃珠或磁珠用于通過(guò)固體剪切的作用來(lái)使細(xì)胞裂解的方法。這種細(xì)胞裂解法的機(jī)械剪切力足夠溫和，可以保持細(xì)胞器的完整性，具有較高的細(xì)胞破碎率可大規(guī)模使用，適 用于各種細(xì)胞破碎。缺點(diǎn)是：大分子內(nèi)容物較易失活，并且漿液分離較為困難。
3.超聲波破碎儀
超聲波均質(zhì)器的工作原理是在浸入細(xì)胞溶液中的鈦探針中引起振動(dòng)。發(fā)生稱(chēng)為空化的過(guò)程，其中微小氣泡形成并爆炸，產(chǎn)生局部沖擊波并通過(guò)壓力變化破壞細(xì)胞壁。這種方法非常適用于植物和真菌細(xì)胞，但有一個(gè)缺點(diǎn)：噪音較大，所以使用時(shí)，必須在額外的房間內(nèi)進(jìn)行。
4.均質(zhì)機(jī)破碎法
均質(zhì)器在細(xì)胞上使用類(lèi)似于珠法的剪切力。可以通過(guò)將細(xì)胞擠壓到比它們略小的管子中來(lái)進(jìn)行均質(zhì)化，從而剪掉外層（法壓）或使用攪拌機(jī)中的旋轉(zhuǎn)刀片（轉(zhuǎn)子-定子處理器）。
5.冷凍破碎法
凍融循環(huán)通過(guò)在解凍時(shí)形成冰晶和細(xì)胞膨脹來(lái)起作用，最終導(dǎo)致破裂。用于藻類(lèi)和軟植物材料。缺點(diǎn)是非常耗時(shí)。
6.高溫（微波、高壓釜）破碎法
高溫（和壓力）會(huì)破壞細(xì)胞壁內(nèi)的鍵，也會(huì)使蛋白質(zhì)變性。盡管速度很快，但如果您的應(yīng)用受到熱對(duì)電池其余部分的損害影響，您最好找到另一種方法。
二、 非機(jī)械細(xì)胞破碎的方法有哪些?
非機(jī)械方法會(huì)涉及到添加分解細(xì)胞壁成分相關(guān)的酶或化學(xué)品。它們通常與機(jī)械力結(jié)合使用，以確保*破壞細(xì)胞。使用它們的缺點(diǎn)是細(xì)胞裂解后較難將細(xì)胞從這些物質(zhì)中分離出來(lái)。
1.酵素
天然存在的酶可用于去除細(xì)胞壁，例如在分離原生質(zhì)體（無(wú)壁細(xì)胞）時(shí)。根據(jù)您使用的生物組織樣本，可以使用 纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、溶菌酶（破壞肽聚糖）、甘露糖酶、聚糖酶（等）等溶菌酶。
2.化學(xué)品
醇、醚或氯仿等有機(jī)溶劑可以通過(guò)滲透細(xì)胞壁和細(xì)胞膜來(lái)破壞細(xì)胞壁。如果您想提取疏水性分子（如植物色素），它們會(huì)較為方便，因?yàn)樗鼈儠?huì)被收集在溶劑中。通常用于植物成分的萃取。EDTA主要用于破壞革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁，因?yàn)?其細(xì)胞壁含有脂多糖，這些脂多糖由 Mg 2+和 Ca 2+等陽(yáng)離子穩(wěn)定。EDTA 會(huì)螯合陽(yáng)離子，從而在細(xì)胞壁上留下孔洞，使外來(lái)基因輕松穿透細(xì)胞壁到達(dá)細(xì)胞內(nèi)部。
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