SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳原理：
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，是在聚丙烯酰胺凝膠系統(tǒng)中引進(jìn)SDS（十二烷基硫酸鈉）， SDS會(huì)與變性的多肽，并使蛋白帶負(fù)電荷，由于多肽結(jié)合SDS的量幾乎總是與多肽的分子量成正比而與其序列無關(guān)，因此SDS多肽復(fù)合物在丙稀酰胺凝膠電泳中的遷移率只與多肽的大小有關(guān)，在達(dá)到飽和的狀態(tài)下，每克多肽可與1.4g去污劑結(jié)合。
當(dāng)分子量在15KD到200KD之間時(shí)，蛋白質(zhì)的遷移率和分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW為分子量，X為遷移率，k、b均為常數(shù)，若將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的遷移率對(duì)分子量對(duì)數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知蛋白質(zhì)在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得分子量。
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳常用試劑及設(shè)備
試劑：蛋白值樣品，SDS-PAGE loading buffer，PBS，Tris-Hcl (PH 8.8)， Tris-Hcl (PH 6.8) ，30%丙烯酰胺，10%SDS，10%過硫酸，5×SDS-PAGE電泳緩沖液，考馬斯亮藍(lán)R-250染色液，脫色液、天能預(yù)制膠。
儀器耗材：垂直電泳槽，電泳儀，電泳儀電源，移液槍，移液槍tip吸頭，離心管、試劑瓶。
實(shí)驗(yàn)步驟
一、凝膠配置
1．分離膠的配制
（1）找出配套的膠板，用擦鏡紙擦干凈，并固定在配膠器上。隨后用去離子水試漏；
（2）若膠板不漏水，就進(jìn)行分離膠的配制。依次將水、30%丙烯酰胺、1.5M Tris-Hcl（PH 8.8）、10%SDS、10%過硫酸銨加到干凈的小燒杯中，混勻（1mm的膠板，一般配一塊膠用5ml。所配的膠濃度一般為12%，但濃度也要視情況而定。蛋白越小，膠的濃度越大）；
（3）將膠板中的水倒掉，并用濾紙吸干水分（不要將濾紙塞到膠板底部）；
（4）小燒杯中再加入TEMED，混勻。（TEMED可使膠凝固，所以最后加）；
（5）灌膠：混勻的分離膠沿著膠板邊緣輕輕灌下，防止產(chǎn)生氣泡；
（6）用水將分離膠壓平（用水灌滿，同時(shí)加水時(shí)要緩慢加入，防止把膠吹起）。
也可以直接使用預(yù)制膠，預(yù)制膠直接拆開即用，不用配制。
2．濃縮膠的配制
（1）待分離膠與水中間形成明顯的橫線，即分離膠凝固。隨后進(jìn)行濃縮膠的配制，依次將水、30%丙烯酰胺、1.0M Tris-Hcl（PH 6.8）、10%SDS、10%過硫酸銨加到干凈的小燒杯中；
（2）將分離膠上層的水倒掉，并用濾紙吸干水分（盡量不要把濾紙插入）；
（3）小燒杯中再加入TEMED，混勻；
（4）灌膠。然后插入梳子；
（5）把制膠器倒過來，膠仍然不會(huì)往外流，或可以明顯看出梳子中兩個(gè)齒之間的膠面明顯凹下去，說明濃縮膠凝固。將凝固的膠板裝入電泳槽內(nèi)，并在電泳槽內(nèi)加入SDS-PAGE電泳緩沖液，把膠浸泡一段時(shí)間，時(shí)間越長(zhǎng)越好（防止梳子與膠相連，或膠因濕度不夠而縮減）；
（6）點(diǎn)樣時(shí)，再把梳子拔出來，拔時(shí)動(dòng)作要輕，防止膠齒被拔斷。
二、SDS-PAGE電泳步驟
1、調(diào)膠：拔掉SDS膠上的梳子，并用小針調(diào)整齒的位置（使它們都平行）。
2、點(diǎn)樣：用20µL的小槍頭，吸煮過的樣品10µL，對(duì)準(zhǔn)膠孔點(diǎn)樣，注意不要把樣品點(diǎn)在外面。使用適當(dāng)?shù)姆肿恿康鞍譵arker。
3、電泳：電泳儀正負(fù)極接好，打開電源。濃縮膠：電壓 low 100V，分離膠：電壓 high 150V。
4、卸膠：等膠內(nèi)的所有的藍(lán)色都跑出去，電泳停止，一般時(shí)間為1-2小時(shí)左右。把膠板從電泳儀上卸下，用刀片把膠板撬開，膠的濃縮膠部分割除；
5、染色：放入考馬斯亮藍(lán)R-250染色液中進(jìn)行常溫過夜染色；
5、脫色：將過夜染色的SDS-PAGE膠放入脫色液中進(jìn)行脫色，直到背景發(fā)白。
蘇州阿爾法生物是一家集生命科學(xué)儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)耗材和實(shí)驗(yàn)試劑供應(yīng)于一身的專業(yè)公司。阿爾法生物產(chǎn)品覆蓋生命科學(xué)研究、生物制藥、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域，包括的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備有生物顯微鏡、細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)、蛋白電泳系統(tǒng)、數(shù)字PCR儀、高通量分析儀、高速冷凍離心機(jī)、超速離心機(jī)、臺(tái)式高速離心機(jī)、低速離心機(jī)、落地式離心機(jī)、迷你離心機(jī)、真空濃縮儀、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器、細(xì)菌培養(yǎng)箱研磨儀等，實(shí)驗(yàn)耗材常用的nest培養(yǎng)瓶、rainin移液槍tip頭、離心管、PCR管、8聯(lián)排管、三角搖瓶、培養(yǎng)皿等，實(shí)驗(yàn)試劑包括天根試劑盒、質(zhì)粒抽提試劑盒、蛋白抗體、碧云天試劑、阿拉丁試劑、腫瘤細(xì)胞株、基因編輯細(xì)胞、支原體清除試劑盒等。阿爾法生物一直與國(guó)際生命科學(xué)儀器廠商以及一些新興科技公司保持著深度的合作關(guān)系，這也為產(chǎn)品供應(yīng)和技術(shù)支持提供了有力保障。 作為十四年年專注于實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、實(shí)驗(yàn)耗材和實(shí)驗(yàn)試劑供應(yīng)商，無論是實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)使用，還是科研人員的前沿探索，阿爾法生物都能夠?yàn)槟峁┝己玫能浻布С趾涂旖?、周到的服?wù)。
